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凱氏定氮儀|定氮儀|消化爐

測定蛋白質(zhì)含量的方法探討

作者:祎鴻儀器 點(diǎn)擊率: 發(fā)布時(shí)間:2017-11-09 17:13:00
      蛋白質(zhì)含量的測定是目前生物化學(xué)中常用的一項指標測定。目前國內外所采用的檢測方法主要有凱氏定氮法、紫外吸收法、雙縮脲分光光度法、考馬斯亮藍法(Bradford法)、Lowry法、二辛可酸比色法(BCA法)、熒光光度法、電流法、毛細管電泳分析法、羅丹明生物探針?lè )ㄒ约案咝Ч庾V遙感技術(shù)分析法等。

  蛋白質(zhì)測定方法有十幾種,在常用測定方法中,考馬斯亮藍法靈敏度最高,比紫外吸收法靈敏10~20倍。凱氏定氮法測定結果較為準確,靈敏度高,故往往以該法測定的蛋白質(zhì)作為其他方法的標準蛋白質(zhì)。紫外吸收法和考馬斯亮藍法都是較為快速的測定方法。另外,不同方法下不同物質(zhì)對蛋白測定的干擾也不同。故對于不同樣品,應選擇合適方法測定,如對測定結果要求較高,則往往需要結合多種方法測定,并分析測定結果,最終得出最準確蛋白含量值。

  食品中蛋白質(zhì)含量是衡量其營(yíng)養價(jià)值高低的一項重要指標,因此有關(guān)蛋白質(zhì)的分析檢測對于人和動(dòng)物健康來(lái)說(shuō)尤為重要。目前所采用的蛋白質(zhì)含量檢測方法主要有凱氏定氮法、紫外吸收法、雙縮脲法、考馬斯亮藍法等,本文就實(shí)驗室常用的幾種蛋白質(zhì)檢測方法及其特點(diǎn)分別作簡(jiǎn)單介紹。

  每種測定法都有其優(yōu)勢,但也不可避免存在一定缺點(diǎn)。實(shí)驗中,應綜合考慮各方面因素再選擇最佳使方法。實(shí)驗對測定所要求的靈敏度和精確度、蛋白質(zhì)的性質(zhì)、溶液中存在的干擾物質(zhì)、測定所要花費的時(shí)間等因素都會(huì )影響最終實(shí)驗方法的選擇。

  本文重點(diǎn)介紹凱氏定氮法

  基本原理:凱氏定氮法包括微量定氮法和全量定氮法兩種方法,其測定蛋白質(zhì)含量的過(guò)程主要包括消化、蒸餾、吸收、滴定等步驟。

凱氏裝置

  含氮有機物與濃硫酸共熱時(shí),其中的碳、氫二元素被氧化成二氧化碳和水,而氮則轉變成氨,并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨,此過(guò)程稱(chēng)為“消化”。濃堿可使消化液中的硫酸銨分解,游離出氨,借水蒸汽將產(chǎn)生的氨蒸餾到硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,溶液中氫離子濃度降低。用標準無(wú)機酸滴定,直至恢復溶液中原來(lái)氫離子濃度為止,即可根據所用標準酸的當量數計算出待測物中的總氮量。蛋白質(zhì)中的氮含量一般為16%,據此推斷蛋白質(zhì)含量。

  凱氏方法特點(diǎn):該方法儀器裝置簡(jiǎn)單,試劑用量少且廉價(jià)易得。精密度、準確度高,最低可檢出0.05mg氮,且樣品用量少。但操作較繁瑣費時(shí),不利于大批樣品的測定,且測定的結果只能是粗蛋白質(zhì)的含量,處理未知樣品時(shí),其誤差還有變大的危險。

  應用領(lǐng)域:適用于一切形態(tài)的食品與生物樣品。對于不溶和渾濁的樣品,其他許多方法不能進(jìn)行測定,凱氏定氮法是唯一可行的分析方法。

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